安捷伦 Cary 60 紫外-可见分光光度计测定 4°C下微量 DNA 的纯度

在之前的文章中，我们介绍了安捷伦 Cary 50 紫外-可见分 光光度计配置  Hellma（德国  Hellma GmbH & Co.）的 Traycell 微量比色

池紫外-可见在室温下准确、可重现地测 定微量 DNA 的方法 3。在本研究中，我们采用带光纤探头的 Cary 60 紫外-可见分光光度计进

行了方法扩展研究，在 4 。C 以及普通实验室环境光照条件下测定了小体积样品。本方 法使得用户可以将仪器靠近样品，而不是像传

统光谱方法 那样将样品放入仪器中，从而能够在很短的时间内完成分 析。Cary 60 的光学设计使这一优势得以实现，它主要凭 借

其的高强度闪烁氙灯以及最新型的电子器件，使系 统能够有效地监控吸光度的微小变化而不受环境背景光的 任何影响。本文深入

讨论了这一方法的主要优点。

仪器与材料

方法与结果

将小牛胸腺 DNA 用纯净水（MilliQ）稀释得到不同浓度的样 品，浓度范围 0–50 µg/ml。

配有光纤耦合器以及微探头的 Cary 60, 如图 1 所示。在 Eppendorf 管中加入 150 µL 纯净水（MilliQ），将其读数作为 空白。

由于分子生物学试剂通常保存于冷藏条件下，因此所有样 品直接从 4 。C 冰箱中取出并进行分析。

图 1. 配有光纤附件的 Cary 60 测试 4 。C 下 Eppendorf 管中 150 μL DNA 的示意 图。

开始时，使用 WinUV 软件“扫描"模块在 340 到 240 nm 范 围进行扫描以确认最大吸收峰以及所购买的按 50:50 稀释 的 DNA 样品的可靠性（图 2）。

图 2. 对 4 。C 下两个浓度的 150 µL DNA 样品的扫描表明特征吸收峰出现在 260 nm 处。注意：50 µg/ml DNA 最大吸光度值 1.0Abs，25 µg/ml DNA 最大吸光度 值 0.5Abs，遵守 Beer Lambert 定律（A = εcl）。

为 了 确 认  DNA  的 纯 度 ，使 用   WinUV  软 件 专 门 的 “RNA/DNA"模块测定 260/280 比率，该模块可自动计算 DNA 样品的纯

度。如图3 所示，这一模块使用非常简单，可 以在一分钟内完成分析。

图 3. 简便、专用的 Cary WinUV 自动计算 DNA 的纯度、可靠性和浓度

最后，绘制浓度曲线以评估同一实验室条件下不同浓度 DNA 样品读数的线性和重现性（图4）。在两个 DNA 样品读 数间隙使

用 MilliQ 纯净水清洗微探头。

讨论

测定五个样品所用的时间不到两分钟。传统方法使用微量 比色皿，需要等待样品加热至室温，而且在每两次测定间 需要清洗微量比色

皿。总之，使用 Cary 60 光纤系统可以显 著降低大约 80% 的分析时间，同时采用光纤技术不易受到 样品处理引起的潜在污染。使用微

探头可以获得高精度的 数据并大大缩短测定低温样品所需的时间，这表明 Cary 60 是一种适于测定生物样品（如 DNA）的简便、快速且

高性价 比的系统。本方法可以轻松地直接扩展到其它样品类型， 例如可在 280 nm 处测定蛋白质。

结论

Cary 60 紫外-可见分光光度计是使用光纤采样的理想仪器， 它的高强度闪烁氙灯可以提供的灵敏度和重现性。 本应用报告所展示的测

定 DNA 样品时的分析速度、结果重  现性以及易用性证明了该仪器系统的*优势。

使用带光纤的 Cary 60 分析生物样品还具有如下优点：

•     可以直接测定高温或低温样品（4 °C – 110 °C）而无需 考虑冷凝的问题，如果使用比色皿则由于冷凝可能导 致结果不正确或重现性不好

•     样品体积不受限制，可以低至 40 µL，也可以无限大

•     无需购买昂贵的石英微量比色皿，更节省了清洗比色 皿的时间

•     使用反射探头还可以分析固体、粉末或凝胶类样品

图 4. 使用微探头光纤附件在实验室常规光照条件下测定 4 °C 下 Eppendorf 管中 50 µL DNA 样品（0–

50 µg/mL）得到的浓度曲线。校准方程：Abs = 0.02393*浓 度；相关系数 = 0.99126。