服务电话

15205180073

当前位置:首页  >  技术文章  >  荧光定量PCR实验方法与操作指南

荧光定量PCR实验方法与操作指南

更新时间:2024-06-21      点击次数:142
   荧光定量PCR(qPCR)实验方法与操作指南如下:
  一、实验准备
  材料准备:包括PCR试剂盒、模板DNA或RNA样本、特异性引物、荧光染料(如SYBRGreen)、DNA聚合酶、缓冲液、dNTPs和PCR管等。
  二、RNA提取与准备
  使用trizol法或其他常用RNA提取试剂盒,从组织或细胞样本中提取RNA。确保在超净工作台上进行,并避免RNA酶污染。
  对于RNA样本,需通过反转录反应将其转化为cDNA,以便进行后续的qPCR实验。
  三、引物与探针设计
  根据目标序列设计特异性引物,确保引物具有相近的Tm值,以保证同步扩增。
  选择合适的荧光染料或标记的探针,用于实时检测PCR产物的生成。
  四、PCR体系准备
  根据PCR试剂盒的说明书,准备包含缓冲液、dNTPs、引物、荧光染料、聚合酶和水的PCR体系。
  在无菌条件下操作,避免污染。
  五、PCR反应
  将PCR管放入PCR仪中,设定合适的PCR反应条件,包括退火温度、扩增周期数等。
  启动PCR程序,进行实时荧光定量PCR反应。
  六、数据分析与结果解读
  利用相关软件对PCR仪生成的荧光信号数据进行分析,包括绝对定量法、相对定量法和标准曲线法等。
  根据分析结果,计算样本中目标序列的浓度或表达水平。
  以上即为荧光定量PCR实验的基本方法与操作指南。在实验中,应严格按照操作规程进行,确保实验的准确性和可重复性。
南京新飞达光电科学技术有限公司
  • 联系人:孙张凯思
  • 地址:南京市秦淮区石鼓路阳光大厦
  • 邮箱:szks@xfdoe.com
  • 传真:025-58932472
关注我们

欢迎您关注我们的微信公众号了解更多信息

扫一扫
关注我们
版权所有©2024南京新飞达光电科学技术有限公司All Rights Reserved    备案号:苏ICP备10072628号-2    sitemap.xml    总流量:69033
管理登陆    技术支持:化工仪器网